产品目录

DAPI是一种蓝色核酸染料，优先染dsDNA，DAPI表现为可集中结合在DNA双链的AT小沟，结合后的DAPI荧光会发生20倍增强。同时，DAPI也可以结合RNA，与DNA不同，一般认为DAPI结合于RNA的AU区。DAPI/RNA的复合体(500nm)有比DAPI/dsDNA复合体(460nm)更长的荧光波长。DAPI是一种常用的多色荧光技术中的核复染剂。他的蓝色荧光可以与绿色、红色、橙黄色探针形成鲜明对比。

1. 荧光显微镜贴壁细胞复染
   样品准备：根据需要固定样本。DAPI染色通常与其他染色步骤同时操作。
   注意：固定与促渗不是所有做复染的样本都必须要做。
   
   1. PBS简单平衡样本。
      
   2. 1mL去离子水溶解5mg DAPI可以得到14.3mM的DAPI储液。
      
   3. PBS稀释DAPI储液至300nM。加入大约300μL稀释后的DAPI染色液至样品盖玻片上，保证没过样本。
      
   4. 孵育1～5分钟。
      
   5. PBS洗涤样本几次，去掉片子上多余的水分。
      
   6. 选取合适的滤光片观察样本。
   
   
   
2. 流式细胞仪悬浮细胞复染
   
   1. 样品准备：根据需要固定样本。DAPI染色通常与其他染色步骤同时操作。
      
      1. 收集细胞悬液调整数量至2×10⁵～1×10⁶ cells.
         
      2. 离心收集细胞弃上清液。
         
      3. 室温加入1mL PBS轻弹管壁，使之重悬。
         
      4. 将上述细胞悬液用移液器慢慢加入到4mL的无水乙醇后，最大转速涡旋混匀，将细胞放置于-20度，5～15分钟。
         
      5. 离心收集细胞，去掉乙醇。
         
      6. 加入5mL PBS重悬细胞，室温放置15分钟，使得细胞重新吸收水分。
   2. 复染操作
      
      1. 1mL去离子水溶解5mg DAPI可以得到14.3mM的DAPI储液。
         
      2. 配制染色缓冲液(100mM Tris,pH7.4,150mM NaCl,1mM CaCl₂,0.5mM MgCl₂,0.1% Nonidet P-40)，稀释DAPI储液至3μM
         的工作染色浓度。每一个染色反应大约需要1mL的DAPI染色工作液
         
      3. 接上A.6步骤，离心收集细胞，加入1mL DAPI染色工作液。
         
      4. 室温孵育15分钟。
         
      5. 直接上机分析。(如需进行荧光显微镜观察，细胞可以离心后去掉上清，以新鲜缓冲液重新悬浮细胞，吸取一滴悬浮液加到载玻片上，加盖玻片后观察。)
   
   
   
3. 染色质FISH复染
   
   1. 样品准备：
      根据需要处理样本，蒸馏水简单冲洗，去除缓冲液，最后的冲洗可以有助于减少非特异性背景，再晾干。
      
   2. 复染步骤
      
      1. 1mL去离子水溶解5mg DAPI可以得到14.3mM的DAPI储液。
         
      2. PBS稀释DAPI储液至300nM。吸取300μL的染色液直接加到样品上，加盖玻片使染色液均匀分布于样本上。
         
      3. 避光室温孵育30分钟。
         
      4. 小心移去盖玻片，PBS或蒸馏水洗涤样本，去掉多余染料。
         
      5. 加盖玻片，用指甲油或中性树脂封片，或根据需要用抗淬灭试剂封片。
         
      6. 6 选取合适的滤光片观察样本。